中藥材從種植、生產(chǎn)、流通的全過程周期較長(zhǎng)，控制不當(dāng)易受真菌毒素危害，再加上真菌毒素的產(chǎn)生與宿主基質(zhì)特性密切相關(guān)，不同類型中藥材會(huì)產(chǎn)生種類和性質(zhì)各異的真菌毒素，方位加強(qiáng)中藥材中真菌毒素污染水平監(jiān)控成為《中國(guó)藥典》2020版的重中之重。

2020版《中國(guó)藥典》6月正式發(fā)布，自該標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布以來，中藥分析檢測(cè)工作者面臨了一系列的挑戰(zhàn)。為了宣貫2020年《中國(guó)藥典》的變化，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司開展“2020年中國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)解讀以及中藥檢測(cè)分析技術(shù)”專題培訓(xùn)班。針對(duì)此次培訓(xùn)，今天小編整理了老師們關(guān)注有關(guān)真菌毒素檢測(cè)的八大熱點(diǎn)問題。

01 

Q:黃曲mei素檢測(cè)有哪些注意事項(xiàng)？怎么樣才能使測(cè)試結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠？

A:在測(cè)試黃曲mei素的時(shí)候需要注意如下幾點(diǎn)，這樣能保證測(cè)試的準(zhǔn)確性。

（1）取樣一定要均勻，對(duì)于性質(zhì)特殊的供試品，可適當(dāng)調(diào)整取樣量，像地龍比較粘稠的可以適當(dāng)調(diào)整取樣量，不過一般應(yīng)不低于5g；

（2）正確的測(cè)試免疫親和柱，可測(cè)柱回收率，考察免疫親和柱的性能；

（3）采用第yi法液相色譜法測(cè)定結(jié)果超出限度時(shí)，應(yīng)采用第二法液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行確認(rèn)；

（4）進(jìn)行真菌毒素檢測(cè)時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有相應(yīng)的安全防護(hù)措施，不得污染環(huán)境；黃曲霉du素的毒性很強(qiáng)，需要采取必要的安全措施。建議設(shè)用單獨(dú)的實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)器材，不與別的實(shí)驗(yàn)一起混用；

（5）殘留有黃曲霉du素的廢液或者廢渣的玻璃器皿，應(yīng)置于儲(chǔ)存容器（裝有10%次氯酸奶溶液）內(nèi)，浸泡24h以上，再用清水將玻璃器皿清洗干凈。

02 

Q:真菌毒素實(shí)驗(yàn)的過程中使用的對(duì)照品有什么要求？

A:（1）對(duì)照物質(zhì)應(yīng)能夠溯源量值，shou選使用法定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；

（2）很多品種為劇du品，使用時(shí)應(yīng)加強(qiáng)安全防護(hù)；

（3）一般情況下不推薦使用固體純品，已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液（或混合溶液）在痕量分析中使用更為方便，也更為廣泛；

（4）針對(duì)很多劇毒成分，如黃曲霉du素，使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液也能夠有效減少對(duì)檢驗(yàn)人員的安全風(fēng)險(xiǎn)。通常，首先配置成1-100ug/ml的濃溶液，作為儲(chǔ)備液使用。儲(chǔ)備液可保存在惰性，密封，避光，低溫環(huán)境下。儲(chǔ)備液的濃度，溶劑，配制日期應(yīng)詳細(xì)記錄，并在原始記錄中明確顯示，以便于溯源。儲(chǔ)備液的有效期應(yīng)根據(jù)穩(wěn)定性測(cè)試數(shù)據(jù)確定。

03

Q:中藥中痕量殘留量檢測(cè)分析中空白實(shí)驗(yàn)怎么防止污染與干擾？

A:防止污染與干擾是痕量分析質(zhì)量控制的重要內(nèi)容：

（1）避免交叉污染：樣品儲(chǔ)存需要采用通過密封或者分開放置等方式防止樣品之間，防止樣品之間，樣品與潛在污染源之間的互相污染；實(shí)驗(yàn)室器皿建議，檢測(cè)所使用的器皿應(yīng)有針對(duì)性的仔細(xì)清洗，尤其需要避免標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，高濃度陽(yáng)性樣品與普通樣品間的交叉污染。實(shí)驗(yàn)試劑應(yīng)選擇適宜純度，并通過使用瓶口分液器等方式減少試劑瓶多次開啟造成的試劑被污染。

（2）日常質(zhì)控要求：每次檢測(cè)均應(yīng)隨行空白實(shí)驗(yàn)，即不取樣，*按照供試品溶液制備程序操作并測(cè)定，以便反應(yīng)試劑，器皿，環(huán)境對(duì)測(cè)定的干擾情況。當(dāng)空白實(shí)驗(yàn)干擾峰峰面積（響應(yīng)值）不高于較準(zhǔn)曲線濃度低點(diǎn)峰面積（響應(yīng)值）的1/2時(shí)，可認(rèn)為無(wú)干擾。在試驗(yàn)操作過程中，通常按照空白實(shí)驗(yàn)，樣品測(cè)定，回收試驗(yàn)的順序操作，嚴(yán)格避免交叉污染。

04

Q:使用免疫親和柱的注意事項(xiàng)有哪些？樣品的PH在什么范圍時(shí)柱效是hao的？

A:在過免疫親和柱之前如果溶液不夠澄清的話，需要用離心或者玻璃濾紙過濾的方法使溶液澄清后再過免疫親和柱。建議使用前仔細(xì)閱讀使用的注意事項(xiàng)比如可冷藏不能冷凍，注意使用親和柱（shi合的PH值6-8）的時(shí)候先測(cè)一下樣品的PH值，是中性的話柱效果是hao的。在進(jìn)行回收率考察的時(shí)候先進(jìn)行柱回收率的考察，把適當(dāng)?shù)狞S曲mei素的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液先通過免疫親和柱后進(jìn)行測(cè)試，考察一下免疫親和柱的性能，再考察整體的回收率。

05

Q:檢測(cè)限的確定需要做什么工作?準(zhǔn)確度和精密度嗎？檢測(cè)限的概念是應(yīng)該是定量限嗎？

A:檢測(cè)限（報(bào)告限）是指殘留量被作為數(shù)值報(bào)告的低濃度。檢測(cè)限一般等于或略高于低較準(zhǔn)濃度，具有可接受的準(zhǔn)確度和精密度，是高于實(shí)際方法定量限的一個(gè)固定數(shù)值。

當(dāng)MPL（大殘留量）≥0.1mg/kg時(shí)，檢測(cè)限應(yīng)<1/10MRL；當(dāng)MPL<0.1mg/kg時(shí)，檢測(cè)限應(yīng)≤1/3MRL。由于檢測(cè)限的設(shè)定，檢驗(yàn)人員不必每一次進(jìn)行樣品分析時(shí)都嚴(yán)格進(jìn)行LOQ測(cè)定，可以節(jié)省很多人力物力；同一體系內(nèi)部的各實(shí)驗(yàn)室間針對(duì)同一方法也可以設(shè)定一致的檢測(cè)限，這樣一來出具的報(bào)告具有了可比性，也便于統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)布結(jié)果。

06

Q:黃曲mei毒素方法驗(yàn)證中檢出限怎么做？

A:關(guān)于檢出限的概念容易混淆，檢出限有儀器檢出限和方法檢出限兩種。儀器檢出限僅僅反應(yīng)的是檢測(cè)系統(tǒng)的響應(yīng)，通常把標(biāo)準(zhǔn)品稀釋用3倍的信噪比的進(jìn)樣量來表示。方法的檢出限應(yīng)該是在空白基質(zhì)中定量的加入對(duì)照品，后按照供試品的提取方法進(jìn)行提取，然后進(jìn)行檢測(cè)分析，獲得1/10的信噪比。對(duì)應(yīng)的加入的對(duì)照品的濃度就是方法的檢出限。在20版在做黃曲霉mei毒素的測(cè)定實(shí)驗(yàn)時(shí)，建議做儀器的檢出限，然后再折算成樣品的檢出限。

07

Q:不同基質(zhì)的中藥材中真菌毒素的檢測(cè)有什么不同？會(huì)因?yàn)榛|(zhì)不同而出現(xiàn)結(jié)果的差異嗎？

A:基質(zhì)效應(yīng)的影響因子是根據(jù)基質(zhì)效應(yīng)因子進(jìn)行判斷的，基質(zhì)效應(yīng)是指在對(duì)分析物的濃度或質(zhì)量測(cè)定過程中，來自樣品中其它化合物的一種或者幾種綜合的影響。基質(zhì)因子是指空白樣品溶液加標(biāo)測(cè)定值與純?nèi)軇┡渲仆瑯訚舛葮?biāo)準(zhǔn)品溶液測(cè)定值的比值。機(jī)制效應(yīng)的評(píng)定采用的機(jī)制因子進(jìn)行評(píng)定的。不同品種，不同成分，基質(zhì)影響不同，有普遍偏低現(xiàn)象。如果機(jī)制效應(yīng)因子在85%-115%之間說明機(jī)制效應(yīng)在不同的方法不存在顯著差異，不同的品種不同的材質(zhì)機(jī)制效應(yīng)是不同的。按照通則去做，不同基質(zhì)在液質(zhì)上會(huì)有基質(zhì)干擾，這個(gè)干擾的大小會(huì)因?yàn)榛|(zhì)不同而不同，實(shí)驗(yàn)過程中需要針對(duì)不同基質(zhì)做一些方法上的改進(jìn)。例如地龍按藥典沒辦法提取，需要進(jìn)行一些實(shí)驗(yàn)的優(yōu)化和調(diào)整的。

08

Q:怎么做一條好的校準(zhǔn)曲線？

A:校正曲線是用于描述待測(cè)物質(zhì)的濃度或量與相應(yīng)的測(cè)量?jī)x器的響應(yīng)量或其他指示量之間的定量關(guān)系的曲線。校準(zhǔn)曲線的制定需要滿足以下條件：線性范圍在檢測(cè)器jia響應(yīng)范圍內(nèi)；一般要求，低校準(zhǔn)濃度（CL）所對(duì)應(yīng)的樣品中待測(cè)物濃度應(yīng)≤1/10MRL（當(dāng)MRL≥0.1mg/kg時(shí)），或≤1/3MRL（MRL<0.1mg/kg時(shí)）。大殘留*（MRL）所對(duì)應(yīng)的供試品速溶濃度應(yīng)在校準(zhǔn)曲線的中間或偏上濃度位置；gao校準(zhǔn)濃度可根據(jù)樣品中待測(cè)物的可能殘留量及儀器的線性檢測(cè)能力設(shè)置為MRL的2-10倍；線性范圍一般無(wú)需強(qiáng)制通過原點(diǎn)，校準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)一般不低于0.990；當(dāng)線性范圍超過1個(gè)數(shù)量級(jí)時(shí)，可使用分段校準(zhǔn)或采用加權(quán)校準(zhǔn)的方式，測(cè)量誤差小于簡(jiǎn)單的線性校準(zhǔn)；完成樣品測(cè)定或每完成一定批次樣品分析后，應(yīng)再次分析校準(zhǔn)曲線中的代表性濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液（如MRL對(duì)應(yīng)的濃度點(diǎn)），響應(yīng)值和校準(zhǔn)曲線偏差應(yīng)在±15%以內(nèi)。